โรงพยาบาลยโสธรได้เริ่มก่อตั้งขึ้นเมื่อ พ.ศ. 2508 ด้วยงบประมาณของทางราชการ ร่วมกับเงินบริจาคของข้าราชการ พ่อค้าและประชาชนชาวจังหวัดยโสธรในการจัดซื้อที่ดินเพื่อก่อตั้งโรงพยาบาลยโสธร และได้เริ่มเปิดดำเนินการเมื่อ 1 กรกฎาคม 2509 เป็นต้นมา ซึ่งขณะนั้นมีเพียงอาคารผู้ป่วยขนาด 50 เตียง 1หลังมีแพทย์ประจำ 3 คน และพยาบาล 1 คน ผู้ช่วยพยาบาล 2 คนตลอดระยะเวลา 30 ปี ที่ผ่านมาโรงพยาบาลยโสธร ได้มีการพัฒนาในทุก ๆ ด้านอย่างเป็นระบบและต่อเนื่องด้วยการสนับสนุนของพระครูจิตตวิโสธนาจารย์ "หลวงปู่หนู" เจ้าอาวาสวัดดอยแม่ปั๋ง จังหวัดเชียงใหม่ซึ่งเป็นชาวยโสธรโดยกำเนิด และด้วยความศรัทธาของชาวยโสธรที่ได้ร่วมกันบริจาคทุนทรัพย์ในการก่อสร้างอาคาร และจัดซื้อครุภัณฑ์ทางการแพทย์มอบให้แก่โรงพยาบาลยโสธร